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常用的細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法有哪些?

更新時(shí)間:2019-12-27      點(diǎn)擊次數(shù):1350
 
  細(xì)胞凋亡與壞死是兩種*不同的細(xì)胞凋亡形式,根據(jù)死亡細(xì)胞在形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)上的差別,可以將二者區(qū)別開(kāi)來(lái)。細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法有很多,下面介紹幾種常用的測(cè)定方法。
  根據(jù)凋亡細(xì)胞固有的形態(tài)特征,人們已經(jīng)設(shè)計(jì)了許多不同的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測(cè)方法。
  1光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡
 ?。?)未染色細(xì)胞:凋亡細(xì)胞的體積變小、變形,細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象,細(xì)胞凋亡晚期可見(jiàn)凋亡小體。貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落。
 ?。?)染色細(xì)胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化,核膜裂解、染色質(zhì)分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。
  2熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡
  一般以細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變?yōu)橹笜?biāo)來(lái)評(píng)判細(xì)胞凋亡的進(jìn)展情況。
  常用的DNA特異性染料有:HO33342(Hoechst33342),HO33258(Hoechst33258),DAPI。三種染料與DNA的結(jié)合是非嵌入式的,主要結(jié)合在DNA的A-T堿基區(qū)。紫外光激發(fā)時(shí)發(fā)射明亮的藍(lán)色熒光。
  Hoechst是與DNA特異結(jié)合的活性染料,儲(chǔ)存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,使用時(shí)用PBS稀釋成終濃度為2~5mg/ml。
  DAPI為半通透性,用于常規(guī)固定細(xì)胞的染色。儲(chǔ)存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,使用終濃度一般為0.5~1mg/ml。
  結(jié)果評(píng)判:細(xì)胞凋亡過(guò)程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為三期:Ⅰ期的細(xì)胞核呈波紋狀(rippled)或呈折縫樣(creased),部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài);Ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化;Ⅱb期的細(xì)胞核裂解為碎塊,產(chǎn)生凋亡小體。
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