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蛋白酶K的配制標準及保存方法

更新時間:2020-10-22      點擊次數:4158
     蛋白酶K廣泛應用于分子生物學,藥理學等科研方面.一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關的絲氨酸蛋白酶,具有很高的比活性.一般儲存在-20°C,避光防潮密閉干燥。
  蛋白酶K主要應用于基因檢測中基因抽取,是檢測試劑盒生產的重要原料,蛋白酶K產品由于在尿素和SDS中仍然具有降解天然蛋白質的能力,因而被廣泛應用于制備脈沖電泳的染色體DNA,以及去除DNA和RNA中的核酸酶?,F(xiàn)有基因抽提及檢測試劑盒中均需配備該酶。
  蛋白酶K配制標準:20mg/ml蛋白酶K配制標準(proteinaseK):將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,輕輕搖動,直至蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。
  蛋白酶K的保存:保存在-20℃冰箱里,避免反復凍融,有效保證12月。
  蛋白酶K在原位雜交技術中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質的作用,以增加探針與靶核酸結合的機會,提高雜交信號.但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細胞的結構有一定的破壞,導致組織切片的脫落,細胞核的消失,從而影響雜交結果。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,解決上述出現(xiàn)的問題,并能達到理想的染色效果。
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