EZ Trans Lipo細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑（脂質(zhì)體）

產(chǎn)品描述
EZ Trans Lipo細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑（脂質(zhì)體）（以下簡稱“EZ Trans Lipo"）為李記生物新研發(fā)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑，EZ Trans Lipo以納米脂質(zhì)體包裹核酸通過特殊遞送機(jī)制，把外源DNA、RNA、siRNA轉(zhuǎn)入各類細(xì)胞，能轉(zhuǎn)染貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞，還可用于siRNA和shRNA的基因敲除實(shí)驗(yàn)及基因表達(dá)研究。
經(jīng)過對近百種細(xì)胞對比測試，EZ Trans Lipo在絕大部分受檢細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率、細(xì)胞毒性表現(xiàn)均與進(jìn)口型產(chǎn)品一致或更優(yōu)；具備轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性低、適用細(xì)胞廣、性價(jià)比高等優(yōu)點(diǎn)。
訂購信息

運(yùn)輸與保存
藍(lán)冰運(yùn)輸。4℃保存，有效期12個(gè)月。
使用方法
貼壁細(xì)胞（以293T細(xì)胞、96孔板為例）
1.細(xì)胞準(zhǔn)備
轉(zhuǎn)染前一天用1酶消化、鋪板，轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞密度達(dá)到3.0x10⁵ 個(gè)細(xì)胞/mL時(shí)可進(jìn)行轉(zhuǎn)染, 細(xì)胞匯合度達(dá)到70%-80%，保證活細(xì)胞>90%。
2.準(zhǔn)備DNA-EZ Trans Lipo復(fù)合物
（1）取兩支無菌EP管(平行樣)，兩個(gè)EP管各加入5 μL不含抗生素和血清的MEM細(xì)胞培養(yǎng)液，然后每一管各加入EZ Trans Lipo轉(zhuǎn)染試劑0.15 μL，輕微吹吸使混和均勻。
（2）取一支無菌EP管，加入10 μL不含抗生素和血清的MEM細(xì)胞培養(yǎng)液，然后加入待轉(zhuǎn)DNA或質(zhì)粒，確保最終DNA量為0.2 μg，輕微吹吸使混和均勻。
（3）分別吸取將上述含有DNA的培養(yǎng)液5μL加入稀釋好的EZ Trans Lipo的兩個(gè)EP管中, 輕輕吹打、晃動使混和均勻，室溫靜置20 min形成DNA-EZ Trans Lipo 復(fù)合物（室溫條件4 h內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定）。
3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞
把DNA-EZ Trans Lipo 復(fù)合物全部加入到96孔板貼壁培養(yǎng)的293細(xì)胞中（試劑有重復(fù)樣）。逐滴分散加入，輕微晃動。
4.細(xì)胞檢測
加入DNA-EZ Trans Lipo復(fù)合物的細(xì)胞在 37℃ 培養(yǎng)1-3 d（無需特意更換培養(yǎng)液），根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)觀察或收獲細(xì)胞檢測。
 
表1：不同培養(yǎng)體積對應(yīng)的待轉(zhuǎn)DNA、EZ Trans、稀釋液用量

 
 
 
懸浮細(xì)胞（以293FT細(xì)胞、1mL培養(yǎng)體積為例）
1.細(xì)胞準(zhǔn)備
細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染當(dāng)天，細(xì)胞密度達(dá)到2-2.5x10⁶ 個(gè)/mL時(shí)可進(jìn)行轉(zhuǎn)染，細(xì)胞重懸后匯合度達(dá)到70%-80%，保證活細(xì)胞>90%。懸浮細(xì)胞細(xì)胞轉(zhuǎn)染可當(dāng)天接種/鋪板, 只要細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定即可進(jìn)行。
2.準(zhǔn)備DNA-EZ Trans Lipo復(fù)合物
（1）取兩支無菌EP管(平行樣)，兩個(gè)EP管各加入400μL不含抗生素和血清的MEM細(xì)胞培養(yǎng)液, 然每一管各加入EZ Trans Lipo轉(zhuǎn)染試劑15μL，輕微吹吸使混和均勻。
（2）取一支無菌EP管，加入800μL不含抗生素和血清的MEM細(xì)胞培養(yǎng)液，然后加入待轉(zhuǎn)DNA或質(zhì)粒，確保最終DNA量為20μg，輕微吹吸使混和均勻。
（3）分別吸取將上述含有DNA的培養(yǎng)液400μL加入到稀釋好的轉(zhuǎn)染試劑培養(yǎng)液的兩個(gè)EP管中, 輕輕吹打、晃動使混和均勻，室溫靜置20 min（室溫條件4 h內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定）。
3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞
把DNA-EZ Trans Lipo復(fù)合物800μL全部加入到1 mL懸浮培養(yǎng)的293FT細(xì)胞中（有重復(fù)樣）。逐滴分散加入，輕微晃動。
4.細(xì)胞檢測
加入DNA-EZ Trans Lipo復(fù)合物的細(xì)胞，37℃ 懸浮培養(yǎng)細(xì)胞1-3 d（無需特意更換培養(yǎng)液），根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)觀察或收獲細(xì)胞檢測。
注意事項(xiàng)
1.本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
2.DNA-EZ Trans Lipo 的轉(zhuǎn)染過程不要求特意更換，但由于雙抗會影響重組蛋白的表達(dá)，為獲得最佳表達(dá)效果，建議在細(xì)胞轉(zhuǎn)染前2 h更換成不含抗生素和血清的培養(yǎng)基，在轉(zhuǎn)后4-6 h換回含抗生素和血清的培養(yǎng)基。
3.質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)毒素質(zhì)粒。通過260 nm光吸收測定DNA 濃度，260nm / 280nm比值確定 DNA 純度（比值應(yīng)該在1.8～2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。
4.細(xì)胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞，請?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者李記生物的特級胎牛血清（Foetal Bovine Serum）（貨號：AC03L055）培養(yǎng)細(xì)胞。
5.為了減少操作誤差，上述操作步驟設(shè)定了一個(gè)重復(fù)平行樣，用戶可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室目的和實(shí)驗(yàn)室條件調(diào)整。
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